实验室菌种传代的规范流程：从“菌种”到“工作菌株”
发布日期：2026/1/15 11:13:00
从“菌种”到“工作菌株”的传代过程在微生物实验室中具有严格的操作规范和管理要求，目的是确保菌株活性、纯度、遗传稳定性及可追溯性。
一、基本概念区分
- 原始标准菌株（第0代）：由权威保藏机构（如ATCC、CMCC、CGMCC等）提供，通常以冻干或超低温形式保存。
- 储备菌株（第1代）：由标准菌株首次活化后制备并冷冻保存，用于后续传代。
- 工作菌株（第2–4代）：由储备菌株传代获得，用于日常实验或质量控制，传代次数不得超过5代（依据《药品微生物实验室质量管理指导原则》9203）。
二、传代前准备
- 物料平衡新购菌种或灭菌后的琼脂斜面需在室温下平衡30分钟，避免温差导致冷凝水污染。
- 人员防护更换专用洁净服，佩戴N95口罩、无菌手套；使用消毒液彻底清洁双手；在阳性操作室或生物安全柜内操作。
三、标准传代操作流程
步骤1：活化（第0代 → 第1代）
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从冻存管（如-80℃甘油管或冻干管）中取菌； -
接种至非选择性固体培养基（如营养琼脂斜面或平板）； -
适宜温度培养（如35±1℃，18–24小时）； -
获得第1代储备菌株，部分用于保存，部分用于下一轮传代。
步骤2：传代培养（第1代 → 第2–4代工作菌株）
常用方法包括：
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方法 |
适用场景 |
操作要点 |
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斜面划线法 |
细菌、酵母 |
用接种环挑菌，在新斜面划“Z”或“S”形线；避免划破培养基 |
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平板四区划线法 |
纯化分离 |
A→B→C→D四区连续划线，D区获得单菌落 |
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涂布法 |
定量传代 |
取100–200 μL菌悬液涂布于平板，用无菌涂布棒均匀涂开 |
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液体接种法 |
扩大培养 |
取5–10%菌液接入新鲜液体培养基，振荡培养 |
所有工具（接种环、针、移液器吸头等）必须无菌，使用前后灼烧或更换。
四、记录与标识
每支菌株必须标注并记录以下信息：
- 菌种名称（含属、种、保藏编号，如 E. coli ATCC 25922）
- 传代日期
- 当前代数（如P2、P3）
- 培养基类型与培养条件（温度、时间、需氧/厌氧）
- 保藏位置（冰箱编号、冻存盒位置）
- 操作人签名
建议使用电子或纸质《菌种传代与使用记录表》，实现全程可追溯。
五、保存与销毁
- 短期保存：斜面4–6℃，保存数周至数月，需定期转接；
- 长期保存：甘油管（-80℃）、冷冻干燥、液氮等；
- 销毁：污染或超代菌株需经121℃高压灭菌30分钟以上后废弃。
六、关键法规依据（截至2025年）
- 《中国药典》通则9203《药品微生物实验室质量管理指导原则》
- 《微生物实验室菌株管理全流程规范》
- ISO 11133:2014（培养基质量控制）
- 各保藏中心（ATCC/CGMCC等）提供的说明书
- 总结：
- 从原始菌种到工作菌株，核心在于控制代数、防止污染、规范操作、完整记录。只有严格遵循标准化流程，才能确保实验结果的可靠性与合规性。
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